Reacción en Cadena de la Polimerasa PCR de dos rondas con reamplificación desde gel para detectar dirofilaria immitis en perros de El Oro Ecuador

Abstract

La dirofilariosis cardiopulmonar por Dirofilaria immitis es una zoonosis transmitida por mosquitos que afecta a perros en regiones tropicales su diagnóstico exige integrar pruebas serológicas y moleculares para evitar sobre o subestimaciones Este estudio tuvo como objetivo detectar molecularmente D immitis en perros de la provincia de El Oro Ecuador mediante PCR punto final del gen COI y confirmar la identidad por secuenciación incorporando una ruta de re amplificación cuando aparecieron dímeros o bandas inespecíficas Se realizó un estudio observacional descriptivo y transversal con enfoque cuantitativo en 40 caninos con signos compatibles evaluados mediante inmunocromatografía IC los IC positivos se retestearon y pasaron a PCR amplicón ~150 pb Cuando la primera ronda mostró perfiles subóptimos purificamos la banda específica en gel y realizamos una segunda PCR con los mismos cebadores dos rondas no anidada Los productos positivos se secuenciaron en doble dirección La IC fue positiva en 24 40 60 0% La PCR confirmó D immitis en 10 24 IC+ 41 7% y no detectó en 14 24 58 3% La positividad por PCR se concentró en Machala 6 casos seguida de Santa Rosa 3 casos y Huaquillas 1 caso El análisis estadístico sugirió diferencias en la distribución de casos positivos entre cantones χ² = 15 27 p = 0 00048 sin embargo este hallazgo debe interpretarse con cautela debido al tamaño muestral limitado y a la distribución desigual de la muestra entre jurisdicciones La re amplificación desde banda purificada resolvió dímeros inespecificidad y permitió obtener amplicones aptos para secuenciación Concluimos que la serología aislada sobreestima la ocurrencia la PCR con re amplificación incrementa la especificidad y la certeza diagnóstica Un algoritmo escalonado IC + microfilarias → PCR con re amplificación cuando aplique → secuenciación optimiza el diagnóstico y la vigilancia de la dirofilariosis canina en El Oro